级博士研究生奚宇菲

两种大青叶基原植物（菘蓝和蓼蓝）的化学成分及其神经保护活性研究

奚宇菲，年6月获得沈阳药科大学中药学专业学士学位，同年9月通过推免进入沈阳药科大学天然药物化学专业攻读硕士学位，导师宋少江教授，年9月于沈阳药科大学天然药物化学专业提前攻读博士学位，导师宋少江教授。课题为两种大青叶基原植物（菘蓝和蓼蓝）的化学成分及其神经保护活性研究。

1、立题依据

我国大青叶资源分布广泛，各地用药习惯不同，大青叶的使用十分混乱。市场上的习用品包括十字花科植物菘蓝的干燥叶还包括蓼科植物蓼蓝的干燥叶，两者均以生物碱为主要的活性成分，但国内外学者对二者的化学成分研究较少。课题组前期对大青叶习用品之一的菘蓝叶中的成分进行了系统的研究，发现了大量结构新颖的生物碱类化合物，特别是这些化合物大多以外消旋混合体的形式存在。将生物碱对映异构体拆分成具有光学活性的化合物并且对它们进行神经保护活性测试，结果发现这些化合物表现出了较好的活性。结合多种分离手段在对菘蓝叶继续进行分离的基础上对大青叶的另一种习用品——蓼蓝叶进行研究，从中发掘结构新颖、具有神经保护活性的化合物，提高该植物化学结构的多样性，为大青叶的开发和应用提供科学依据和理论支持。研究课题获得了国家自然科学基金面上项目（No:）、国家自然科学基金青年项目（No:）、辽宁省自然基金面上项目（No:-MS-）以及辽宁省教育厅科学研究经费项目（No:LJC05）的资助。

2、研究内容

运用多种色谱分离方法，从两种大青叶习用品菘蓝和蓼蓝干燥叶的醇提取物中分离了个化合物，综合应用波谱学方法结合量子化学计算，确定了全部化合物的结构，其中36个为新化合物。这些化合物的发现丰富了大青叶的化学成分研究，并为后续的药理研究奠定了物质基础。

对于生物碱类化合物的神经细胞保护实验表明，部分化合物活性较好，这些实验拓展了传统中药大青叶的潜在药用价值。对于7对生物碱对映异构体的活性结果显示，部分化合物显示出了一定的对映选择性。

3、结果与讨论

1)本研究从菘蓝叶的80%乙醇提取物中，共分离得到个化合物，其中有30个新化合物（57个生物碱，14个木脂素，33个其他类）。从蓼蓝叶的70%乙醇提取物中，共分离得到27个化合物，包括12个生物碱、4个木脂素、11个其他类，其中新化合物6个。

2)对菘蓝叶中的化合物A1-A3,A4a/A4b和A5a/A5b利用硫磺素T(ThioflavinT,Th-T)测定法检测它们抑制Aβ1-42蛋白聚集活性，阳性药为姜黄素(Curcumin)。结果显示，化合物A1(72.1%),A2(79.8%)和A5a(81.8%)的活性强于阳性对照药姜黄素(67.0%at20μM)，而化合物A4a(64.9%)和A4b(68.5%)的活性较为接近。另外，化合物A5a(81.8%)的活性最强，而它的对映异构体A5b的活性结果最低，为63.1%，显示出了一定的立体选择性。随后，我们利用分子对接实验探究了A5a比其对映异构体A5b具有更高的抑制活性的原因。

3)利用H2O2诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤模型，对从菘蓝叶中分离得到的16个生物碱类化合物进行了神经细胞保护活性测试，初步筛选结果表明，化合物A10a/A10b和A11a/A11b显示出更好的神经保护活性，与50μM的H2O2处理组相比，细胞生存率分别提高了26.5%、24.9%、26.9%和28.2%，而阳性对照药Trolox在相同浓度下可使细胞生存率提高21.5%。

4)我们还应用MTT法检测化合物A45a和A45b对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的神经保护作用。结果显示，化合物A45a(77.64%)和A45b(78.62%)在浓度为12.5μM时，对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有中等程度的神经保护活性，而MPP+处理组的结果为62.00%。为了进一步评估化合物A45a和A45b对SH-SY5Y细胞凋亡的抑制作用，我们用AnnexinV-FITC/PI染色法定量测定总细胞群中凋亡细胞的百分率。结果表明，1mMMPP+处理组的细胞凋亡率为21.78%，而用12.5μM浓度的A45a和A45b预处理的细胞凋亡率分别降至10.99%和9.31%，提示A45a和A45b可能具有抑制MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的作用。

5)此外，我们还对生物碱类化合物A15,A16,A17a/A17b的抗神经炎症活性进行了初步的筛选，结果显示，化合物A16,A17a/A17b显示出中等强度活性，而对映异构体A17a/A17b的活性没有明显的立体选择性差异。

4、在学期间研究成果

课题菘蓝叶以第一作者发表SCI论文5篇，总影响因子16.89。课题蓼蓝叶的相关文章暂未发表。研究生工作由宋少江教授和黄肖霄教授共同指导完成，同时感谢课题组刘庆博副教授、姚国栋副教授、张艳副教授以及李玲芝副教授在五年的硕博学习期间给予的指导与支持，感谢彭缨教授在质谱方面提供的支持与帮助。

发表论文情况

1.Bioorg.Chem.,,96:–.

2.Bioorg.Chem.,,88:–.

3.PlantaMed.,,85:–.

4.Fitoterapia,,:–.

5.Chin.J.Nat.Med.(Accept).

所获荣誉及奖励

博士阶段：

-年三次一等学业奖学金

年浙江医药奖学金

年康缘药业奖学金

年康缘药业奖学金

硕士阶段：

-年两次一等学业奖学

相聚植化